河北來(lái)復(fù)醫(yī)藥科技有限公司
聯(lián)系電話：0311-68058422、88662277
地 址：石家莊市高新區(qū)長(zhǎng)江街道天山大街51號(hào)久福大廈8樓818
前言
食品抗氧化劑是能阻止或延緩食品氧化變質(zhì)、提高食品穩(wěn)定性和延長(zhǎng)貯存期的食品添加劑。氧化反應(yīng)不僅會(huì)使食品中的油脂變質(zhì)，而且還會(huì)使食品退色、變色和破壞維生素等，從而降低食品的感官質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，甚至產(chǎn)生有害物質(zhì)，引起食物中毒。
由于合成抗氧化劑化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，價(jià)格比較優(yōu)惠且有較好的效果，在預(yù)防脂質(zhì)氧化的方法中，往往被優(yōu)先考慮，一般使用的合成抗氧化劑有BHA、BHT、TBHQ等。
然而由于這些抗氧化劑不是食品成分之一，而且在食品工業(yè)中存在很多違規(guī)操作，抗氧化劑的添加往往超出規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，越來(lái)越多的研究表明：人工合成的抗氧化劑有一定的毒副作用，有害人們的身心健康，因此對(duì)食品中合成抗氧化劑的測(cè)定顯得尤為重要。
本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法檢測(cè)食品中8種抗氧化劑的方法。
實(shí)驗(yàn)部分
儀器、試劑與材料
主要儀器設(shè)備
高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器）；博納艾杰爾12位負(fù)壓SPE裝置。
試劑材料
乙腈、甲醇為色譜純；實(shí)驗(yàn)用水為超純水，8種抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)品及化學(xué)式，CAS號(hào)見(jiàn)表1；
表1：食品中8種抗氧化劑中文與英文名稱、CAS號(hào)
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序號(hào) |
中文名稱 |
英文名稱 |
英文簡(jiǎn)稱 |
CAS號(hào) |
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1 |
沒(méi)食子酸丙酯 |
Propyl gallate |
PG |
121-79-9 |
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2 |
叔丁基對(duì)苯二酚 |
Tert-butylhydroquinone |
TBHQ |
1948-33-0 |
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3 |
去甲二氫愈創(chuàng)木酸 |
Nordihydroguaiaretic acid |
NDGA |
500-38-9 |
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4 |
叔丁基對(duì)羥基茴香醚 |
Butylhydroxyanisole |
BHA |
25013-16-5 |
|
|
5 |
2,6-二叔丁基-4-羥甲基苯酚 |
2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol |
Ionox-100 |
489-01-0 |
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6 |
沒(méi)食子酸辛酯 |
Octyl gallate |
OG |
1034-01-1 |
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7 |
2,6-二叔丁基對(duì)甲基苯酚 |
Butylated hydroxytoluene |
BHT |
128-37-0 |
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8 |
沒(méi)食子酸十二酯 |
Dodecyl gallate |
DG |
1166-52-5 |
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一次性無(wú)菌注射器；Nylon針式過(guò)濾器 (0.22 μm，直徑13 mm) ；Cleanert S C18-N固相萃取柱：2000 mg/12 mL
樣品制備
樣品提取
稱1 g樣品至50 mL離心管中，加10 mL乙腈，震蕩2 min，超聲10 min，3000 r/min離心5 min，收集上清液至雞心瓶中，再加10 mL乙腈，震蕩2 min，超聲1 min，3000 r/min離心5 min合并上清液。
樣品凈化
先將小柱用5 mL甲醇，5 mL乙腈活化平衡，然后將待凈化液上SPE柱，收集流出液，再用10 mL 乙腈：甲醇=2:1（V/V）進(jìn)行洗脫，并收集洗脫液，40℃蒸干，用1 mL乙腈溶解殘留物，過(guò)0.22 μm Nylon針式過(guò)濾器后待測(cè)。
以上凈化步驟可用卓睿全自動(dòng)固相萃取儀完成。
實(shí)驗(yàn)條件
液相條件
色譜柱：Venusil XBP C18（L） ，5 μm，150 ?，4.6 × 250 mm
流動(dòng)相：A: 0.5% 甲酸水溶液；B: 甲醇；流速：1 mL/min
柱 溫：35℃
進(jìn)樣量：5 μL
檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm
流動(dòng)相梯度見(jiàn)表2：
表2.流動(dòng)相梯度
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時(shí)間（min） |
A% |
B% |
|
0 |
40 |
60 |
|
15 |
30 |
70 |
|
25 |
0 |
100 |
|
30 |
0 |
100 |
|
31 |
40 |
60 |
|
35 |
40 |
60 |
結(jié)果與討論
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
由表3可知，采用固相萃取結(jié)合液相色譜法檢測(cè)食品中8種抗氧化劑，方便面基質(zhì)加標(biāo)回收率在80% ~ 100%之間，能夠滿足檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)要求。
表3.方便面中8種抗氧化劑加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
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物質(zhì)名稱 |
保留時(shí)間（min） |
添加水平（mg/kg） |
回收率 （%） |
CV （%） |
|
PG |
4.433 |
129 |
92.4 |
2.1 |
|
TBHQ |
6.022 |
121 |
98.6 |
1.2 |
|
NDGA |
11.238 |
119 |
100.8 |
0.6 |
|
BHA |
12.933 |
240 |
95.6 |
0.3 |
|
Ionox-100 |
17.711 |
181 |
100.6 |
1.2 |
|
OG |
20.757 |
117 |
91.5 |
1.8 |
|
BHT |
26.481 |
155 |
79.6 |
10.6 |
|
DG |
26.741 |
147 |
84.2 |
1.71 |
圖1.8種抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)溶液液相色譜圖
（標(biāo)準(zhǔn)濃度：PG: 129 μg/mL、TBHQ:121 μg/mL、NDGA: 119 μg/mL、BHA: 240 μg/mL、Ionox-100: 181 μg/mL、OG: 117 μg/mL、BHT: 155 μg/mL、DG:147 μg/mL）
圖2.方便面基質(zhì)空白液相色譜圖
圖3.方便面基質(zhì)加標(biāo)液相色譜圖
（加標(biāo)濃度：PG : 129mg/kg、TBHQ :121 mg/kg、NDGA : 119mg/kg、BHA: 240 mg/kg、Ionox-100: 181mg/kg、OG: 117 mg/kg、BHT: 155 mg/kg、DG:147 mg/kg）
結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)建立了方便面中8種抗氧化劑的檢測(cè)方法，并結(jié)合高效液相色譜對(duì)方便面中8種抗氧化劑含量進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于加標(biāo)量分別為PG : 129 mg/kg、TBHQ:121 mg/kg、NDGA: 119 mg/kg、BHA: 240 mg/kg、Ionox-100: 181 mg/kg、OG: 117 mg/kg、BHT: 155 mg/kg、DG: 147 mg/kg 的方便面樣品，8種抗氧化劑回收率在80% ~ 100%之間，符合實(shí)驗(yàn)要求。
附：相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格描述 |
包裝數(shù)量 |
訂貨號(hào) |
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Venusil XBP C18(L) |
5 μm，150 ?，4.6 × 250 mm |
1支 |
VX952505-L |
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Cleanert S C18-N |
2000 mg/12 mL |
20支/包 |
S18200012N |
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Qdaura® 卓睿全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng) |
4通道 |
1臺(tái) |
SPE-40 |
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15位氮吹儀 |
15位 |
1臺(tái) |
NV15-M |
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保護(hù)柱套 |
適用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm |
1支 |
SH-100 |
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直聯(lián)式保護(hù)柱芯 |
5 μm，150 ?；4.6 × 10 mm |
4支/包 |
VX950105-LS |
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1.5 mL樣品瓶 |
短螺紋透明帶書(shū)寫(xiě)處 32 × 11.6 mm |
100/pk |
1109-0519 |
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1.5 mL樣品瓶蓋 |
9 mm中心孔藍(lán)蓋，紅色橡膠/米色PTFE隔墊 45°Shore A; 1.0 mm |
100/pk |
0915-1819 |
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Nylon針式過(guò)濾器 |
單膜，13 mm，0.22 μm |
200/pk |
AS021320 |
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一次性注射器 |
2 mL無(wú)針頭 |
100支/包 |
LZSQ-2ML |
應(yīng)用編號(hào)：AF10131
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