河北來復醫(yī)藥科技有限公司
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美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾屬于β受體阻斷藥（英：Beta blockers）（又稱β受體阻斷劑），其是一類用來治療心律不齊、防止心臟病發(fā)作后的二次心臟病發(fā)作（二級預防）和在某些情況下用來治療高血壓的藥物。β受體阻斷藥非競爭性阻斷交感神經系統中內源性兒茶酚胺腎上腺素和去甲腎上腺素的作用，尤其是腎上腺素能β受體。有些藥物阻斷所有β-腎上腺素能受體，有些則為競爭性阻斷。
材料與方法
美托洛爾（Metoprolol)，分子式C15H25NO3 ，分子量267.36，CAS : 37350-58-6，pKa 9.5，Kow 1.8。其結構式見圖1。
氧烯洛爾(Oxprenolol)，分子式C15H23NO3 ，分子量265.35，CAS : 6452-71-7，pKa 9.5，Kow 2.2。其結構式見圖2。
普萘洛爾(Propranolol)，分子式C16H21NO2 ，分子量259.34，CAS : 525-66-6，pKa 9.5，Kow 3.48。其結構式見圖3。
本實驗使用Cleanert® Micro Plate可拆卸微孔PEP板對血漿樣品中的美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾進行檢測。Cleanert® Micro Plate可拆卸微孔PEP板(Cat: PE00501-MW, Spec: 5 mg, 1mL/well, 2 plates)，Cleanert® M96 生物樣品前處理儀，1mL 96孔接收板，Venusil MP C18 ( 2.1x150mm，5μm，100? )，以上產品均為天津博納艾杰爾科技有限公司產品；
LC/MS/MS, API 4000+液相色譜-串聯質譜儀（AB SCIEX）。
HPLC條件
色譜柱：Venusil MP C18 ( 2.1x150mm, 5μm, 100 ?);
流速：300 μL/min；
柱溫：30℃；
進樣量：10 μL；
流動相：A-0.1%甲酸水溶液；B-0.1%甲酸乙腈溶液。
表1 HPLC梯度條件
|
Total Time(min) |
Flow Rate(μl/min) |
A (%) |
B (%) |
|
0 |
300 |
78 |
22 |
|
10 |
300 |
78 |
22 |
質譜條件
掃描模式：電噴霧電離正模式；
采集模式：多反應監(jiān)測（MRM）；
電噴霧電壓：5000V；
氣簾氣（curtain gas）：15；
霧化氣（gas 1）：50；
輔助氣（gas 2）：40；
離子源溫度（TEM）：500℃
表2 串聯質譜參數
|
化合物 |
保留時間 |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
美托洛爾（Metoprolol) |
2.5 |
268.3 |
116.1* |
115 |
26 |
|
191.0 |
25 |
||||
|
氧烯洛爾(Oxprenolol) |
4.1 |
260.1 |
183. 1* |
100 |
24 |
|
157.1 |
29 |
||||
|
普萘洛爾(Propranolol) |
7.7 |
266.1 |
116.1* |
105 |
24 |
|
225.1 |
19 |
注：*為定量離子
標準品制備
將美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾標準品各10 mg與10 mL甲醇混合，配置含美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾1 mg/mL的混合標準品。
將1 mg/mL的混合標準品溶液每次用水稀釋10倍，最終配置100 ppb和10ppb的混合標準品。
樣品處理方法
樣品準備：
①高濃度(50 ppb)：將100 ppb混合標準品與血漿等體積混合，配置50 ppb血漿加標樣品。
②低濃度(5 ppb): 將10 ppb混合標準品與血漿等體積混合，配置5 ppb血漿加標樣品。
③不加標：將水與血漿等體積混合，配置不加標的血漿樣品。
固相萃取實驗過程
活化：加入200 μL甲醇； 加入200 μL水；
上樣：200 μL樣品；
淋洗：200 μL 5%甲醇水溶液；
洗脫：50 μL含2%甲酸的乙腈和異丙醇混合溶液=4:6；用150 μL的水定容洗脫液到200 μL，混勻，待測。
結果
表3. 血漿中美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾的回收率，n=8
|
添加濃度 |
美托洛爾 平均回收率(RSD) |
氧烯洛爾 平均回收率(RSD) |
普萘洛爾 平均回收率(RSD) |
|
50 ng/mL |
108.7% (RSD=3.3%) |
103.1% (RSD=5.1%) |
106.0% (RSD=4.4%) |
|
5 ng/mL |
107.7% (RSD=4.5%) |
99.0% (RSD=4.5%) |
94.2% (RSD=8.4%) |
結論
本實驗使用Cleanert® Micro Plate PEP可拆卸微孔板提取血漿中美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾，使用微量體積洗脫，洗脫液不需要氮吹濃縮復溶即可達到相同的檢出限。回收率和RSD值良好，可用于相關的檢測。
訂貨信息
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產品名稱 |
規(guī)格/包裝 |
訂貨號 |
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Cleanert Micro Plate PEP |
5 mg,1 mL/well,可拆卸, 2塊 |
PE00501-MW |
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Cleanert M96 生物樣品前處理儀 |
與96孔板匹配 |
SPE-M96 |
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96位接收板 |
1 mL/well，與96孔板匹配 |
96SP1036-Y |
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Venusil MP C18 |
2.1x150mm,5 μm,100 ? |
VA950502-2 |
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甲醇 |
LC-MS級, 4*2.5L |
LC230 |
|
水 |
LC-MS級，4*2.5L/箱 |
LC365 |
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乙腈 |
LC-MS級，4*2.5L/箱 |
LC015 |
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